૨૮°C પર ૨૫ દિવસના સ્થિર સેવન પછી, *Pleurotus ostreatus* NRC620 ના લેકેસે ફંગલ કલ્ચર માધ્યમમાં સૌથી વધુ પ્રવૃત્તિ દર્શાવી. આ એન્ઝાઇમ માટે શ્રેષ્ઠ pH અને તાપમાન મૂલ્યો અનુક્રમે ૩.૦ અને ૭૦°C હતા. ૪૦°C અને ૫૦°C પર ૨ કલાક સેવન પછી, એન્ઝાઇમ પ્રવૃત્તિ અનુક્રમે ૬૮.૩૩% અને ૫૯.૬૧% જાળવી રાખી. સાઇટ્રેટ-ફોસ્ફેટ બફર (pH 7.0) માં ૨ કલાક સેવન પછી, એન્ઝાઇમ પ્રવૃત્તિ ૧૦૦% પર રહી. ૧૦ mM MgSO₄ અને CuSO₄ ના ઉમેરાથી એન્ઝાઇમ પ્રવૃત્તિમાં અનુક્રમે ૨૧% અને ૩૫% નો વધારો થયો, જ્યારે NaCl, MnCl₂, KCl, અને CaCl₂ એ એન્ઝાઇમ પ્રવૃત્તિને અવરોધિત કરી. ABTS ને સબસ્ટ્રેટ તરીકે ઉપયોગ કરીને, *Pleurotus ostreatus* NRC 620 laccase ના ગતિ પરિમાણો (Km અને Vmax) અનુક્રમે 1.99 mM અને 16,217 μmol min−1 L−1 હતા. સફરજનના રસના નમૂનાઓની એન્ઝાઇમેટિક સારવારથી pH અને સ્નિગ્ધતા બંનેમાં નોંધપાત્ર ઘટાડો થયો, અને આ ઘટાડો સંગ્રહ સમયમાં વધારા સાથે સંકળાયેલો હતો. Laccase સારવારથી સફરજનના રસના કુલ ફિનોલિક સામગ્રીમાં થોડો ઘટાડો થયો, પરંતુ એન્ટીઑકિસડન્ટ પ્રવૃત્તિમાં કોઈ ઘટાડો જોવા મળ્યો નહીં.
તાજેતરના વર્ષોમાં, સંશોધકોએ ખાદ્ય ઉદ્યોગમાં ગ્રીન બાયોટેકનોલોજીના ઉપયોગ પર ધ્યાન કેન્દ્રિત કર્યું છે. લેક્કેસ એ ખાદ્ય ઉદ્યોગમાં સૌથી ઉપયોગી ઉત્સેચકોમાંનું એક છે, જે રસ પ્રક્રિયા, બેકિંગ, વાઇન સ્થિરીકરણ અને ખાદ્ય ઉત્પાદનોના ઓર્ગેનોલેપ્ટિક ગુણોમાં સુધારો જેવા ક્ષેત્રોમાં ઉપયોગમાં લેવાય છે.1ઘણા ઉચ્ચ છોડ અને સુક્ષ્મસજીવો લેકેસ સ્ત્રાવ કરે છે,2અને ડ્યુટેરોમાયસીટ્સ, એસ્કોમાયસીટ્સ અને બેસિડિયોમાયસીટ્સ જેવી ફૂગ પણ લેકેસ ઉત્પન્ન કરી શકે છે.3લેકેસ (EC 1.10.3.2) એ વાદળી ઓક્સિડેઝ છે જે ત્રણ અલગ અલગ કોપર અણુઓ ધરાવતી સિસ્ટમનો ઉપયોગ કરીને મોલેક્યુલર ઓક્સિજનને પાણીમાં ઘટાડે છે, જેનાથી વિવિધ ફિનોલિક સંયોજનો અને સુગંધિત એમાઇન્સનું ઓક્સિડાઇઝેશન થાય છે. ફળો અને શાકભાજીના રસના ઉત્પાદન દરમિયાન, એન્ઝાઇમેટિક અને નોન-એન્ઝાઇમેટિક બ્રાઉનિંગ મહત્વપૂર્ણ મુદ્દાઓ છે.4આ પદાર્થો રસના રંગ, સ્વાદ અને સુગંધ પર નકારાત્મક અસર કરે છે, તેથી તેમને દૂર કરવા જ જોઈએ.5
બધા ફળોમાંથી, સફરજનનો ઉપયોગ વિશ્વભરમાં અને યુરોપિયન યુનિયનમાં સૌથી વધુ થાય છે. 2019 માં, સફરજનનું ઉત્પાદન 87 મિલિયન ટનથી વધુ થઈને વૈશ્વિક સ્તરે ત્રીજા ક્રમે હતું.6સફરજનમાં અસંખ્ય ફિનોલિક સંયોજનો હોય છે, જેમાં ફ્લેવોનોઈડ્સ અને કેફીક એસિડ અને ક્લોરોજેનિક એસિડ જેવા ફિનોલિક એસિડનો સમાવેશ થાય છે.7સફરજનનો રસ સામાન્ય રીતે તેના સ્પષ્ટ સ્વરૂપમાં પીવામાં આવતો હોવાથી, ગાળણ પ્રક્રિયા દરમિયાન લગભગ 50% થી 90% ફિનોલિક ઘટકો ખોવાઈ જાય છે.8આજે, ગ્રાહકો ઓછામાં ઓછા પ્રોસેસ્ડ ઉત્પાદનો પસંદ કરે છે, જેમ કે ઉચ્ચ પોલીફેનોલ સામગ્રી સાથે વાદળછાયું સફરજનનો રસ. જો કે, તેના ઉચ્ચ ફિનોલિક સામગ્રીને કારણે, આ પ્રકારનો સફરજનનો રસ ખાસ કરીને વિકૃતિકરણ અને ઘાટા થવા માટે સંવેદનશીલ હોય છે.9સફરજનના રસને ઘાટો થવાથી બચાવવા અથવા ઘટાડવા માટે 60-90°C પર પેશ્ચરાઇઝેશન જેવી ગરમીની સારવાર પદ્ધતિઓ સહિત વિવિધ તકનીકોનો ઉપયોગ કરવામાં આવે છે.10જોકે, Sauceda-Gálvez દ્વારા સંશોધન મુજબ11, થર્મલ પ્રોસેસિંગ અસ્થિર રસાયણોનો નાશ કરી શકે છે અને સફરજનના રસના ઓર્ગેનોલેપ્ટિક ગુણોને અસર કરી શકે છે. થર્મલ પ્રોસેસિંગ પદ્ધતિઓના વિકલ્પોમાં સુપરક્રિટિકલ કાર્બન ડાયોક્સાઇડ, અલ્ટ્રાવાયોલેટ કિરણોત્સર્ગ, અલ્ટ્રાસાઉન્ડ, ઉચ્ચ હાઇડ્રોસ્ટેટિક દબાણ અથવા ઉચ્ચ-દબાણ એકરૂપીકરણનો સમાવેશ થાય છે.12આ ટેકનોલોજીઓની કાર્યક્ષમતા અને યોગ્ય ફળોના રસની ઉપજ ઉપયોગમાં લેવાતા પરિમાણો અને ઉત્પાદન લાક્ષણિકતાઓ પર આધાર રાખે છે. ઊંચા ખર્ચ, કેટલાક ખાદ્ય ઉત્પાદનોની ગુણવત્તા પર પ્રતિકૂળ અસરો અથવા અપૂરતી એન્ઝાઇમ નિષ્ક્રિયતા દ્વારા તેમનો વ્યાપક ઉપયોગ મર્યાદિત છે.૧૩,૧૪
ફળોના રસને સ્થિર અને સ્પષ્ટ કરવા માટે લાક્કેસનો ઉપયોગ કરી શકાય છે.15ગોકમેન અને અન્ય.16ફળોના રસના સ્પષ્ટીકરણ માટે લેકેસનો ઉપયોગ કરવાની ભલામણ કરવામાં આવે છે કારણ કે તે પોલિમર અથવા ઓલિગોમરમાં રૂપાંતરિત કરીને ફિનોલિક સંયોજનોને અસરકારક રીતે દૂર કરે છે જે કોઈપણ અલ્ટ્રાફિલ્ટરેશન પટલ દ્વારા સરળતાથી દૂર થઈ જાય છે, જેનાથી સફરજનનો રસ 50°C પર છ અઠવાડિયા સુધી સ્થિર રંગ અને સ્પષ્ટતા જાળવી શકે છે. શુદ્ધ *ટ્રાઇકોડર્મા* લેકેસને એલ્યુમિના મણકા પર સ્થિર કરવામાં આવ્યું હતું અને સફરજનના રસના માઇક્રોબાયલ દૂષણને કારણે થતા સ્વાદ વગરના સંયોજનોને પસંદગીયુક્ત રીતે દૂર કરવા માટે ઉપયોગમાં લેવાય છે.17
સફરજનના રસના લગભગ 80-90% અસ્થિર ઘટકો એસ્ટર અને એલ્ડીહાઇડ્સ હોય છે, જે રસને એક અનોખી સુગંધ આપે છે.18સફરજનના રસને સ્પષ્ટ કરવા માટે *ટ્રેમેટેસ વર્સિકલર* ના લેકેસને નારિયેળના શેલમાંથી કુદરતી રેસામાંથી બનાવેલા સસ્તા આધાર પર સ્થિર કરવામાં આવ્યું હતું.19અગાઉના અભ્યાસોમાં એન્ઝાઇમ-મુક્ત અથવા સ્થિર પદ્ધતિઓનો ઉપયોગ કરીને અથવા અલ્ટ્રાફિલ્ટરેશન સાથે સંયોજનમાં સફરજનના રસના સ્થિરીકરણ (રંગ અને ટર્બિડિટી) ની તપાસ કરવામાં આવી છે.૫,૧૯જોકે, સંગ્રહ દરમિયાન સફરજનના રસના ભૌતિક-રાસાયણિક ગુણધર્મો પર ફંગલ લેકેસીસની અસર હજુ પણ અસ્પષ્ટ છે. તેથી, આ અભ્યાસનો ઉદ્દેશ્ય ફંગલ લેકેસીસ સાથે સારવાર અને બે અઠવાડિયાના રેફ્રિજરેટેડ સ્ટોરેજ પછી સફરજનના રસના ભૌતિક-રાસાયણિક ગુણધર્મો, ફિનોલિક સંયોજન સામગ્રી અને એન્ટીઑકિસડન્ટ પ્રવૃત્તિમાં થતા ફેરફારોની પ્રાયોગિક તપાસ કરવાનો હતો. લેકેસીસમાં ફિનોલિક સંયોજનોને ઓક્સિડાઇઝ કરવાની ક્ષમતા હોય છે, જે તેમને રસ સ્પષ્ટીકરણ સહિત વિવિધ ઔદ્યોગિક પ્રક્રિયાઓમાં ઉપયોગ માટે આશાસ્પદ બનાવે છે. આ અભ્યાસમાં *પ્લ્યુરોટસ ઓસ્ટ્રીટસ* NRC 620 માંથી લેકેસીસની તપાસ કરવામાં આવી હતી, જેમાં તેમની પ્રવૃત્તિ માટે આદર્શ પરિસ્થિતિઓ અને રસ સ્પષ્ટીકરણમાં અસરકારકતા પર ધ્યાન કેન્દ્રિત કરવામાં આવ્યું હતું. જ્યારે ઓઇસ્ટર મશરૂમ્સ (P. ostreatus NRC 620) પર સંશોધન હજુ પણ મર્યાદિત છે, ત્યારે અગાઉના અભ્યાસોએ ટ્રેમેટેસ વર્સિકલર અને ગેનોડર્મા લ્યુસિડમ જેવા વિવિધ ફંગલ સ્ત્રોતોમાંથી ઉત્સેચકોની તપાસ કરી છે. આ અભ્યાસનો ઉદ્દેશ્ય ખાદ્ય ઉદ્યોગમાં આ એન્ઝાઇમના સંભવિત ઉપયોગનું મૂલ્યાંકન કરવાનો અને તેના અનન્ય ગુણધર્મો, ખાસ કરીને તેના આદર્શ pH અને તાપમાનને પ્રકાશિત કરવાનો હતો.
2,2′-Azooxybis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) (ABTS) સિગ્મા-એલ્ડ્રિચ (કેનેડા) પાસેથી ખરીદવામાં આવ્યું હતું. બાકીના બધા રીએજન્ટ વિશ્લેષણાત્મક ગ્રેડના હતા.
નેશનલ રિસર્ચ સેન્ટરના માઇક્રોબાયલ કલ્ચર કલેક્શન સેન્ટરે ઓઇસ્ટર મશરૂમ સ્ટ્રેન NRC620 મેળવ્યું. સબકલ્ચર પછી, આ સ્ટ્રેનને બટાકાના ડેક્સ્ટ્રોઝ અગર સ્લેંટ પર 4°C પર સંગ્રહિત કરવામાં આવ્યું હતું. ઇનોક્યુલમ તૈયાર કરવાની પદ્ધતિ નીચે મુજબ હતી: 10-દિવસ જૂનું, સંપૂર્ણ વિકસિત માયસેલિયમ બટાકાના ડેક્સ્ટ્રોઝ અગર પ્લેટો પર ઇનોક્યુલેટ કરવામાં આવ્યું હતું અને 28°C પર ઇન્ક્યુબેટેડ કરવામાં આવ્યું હતું. 10 દિવસ પછી, જંતુરહિત ધાતુ પંચનો ઉપયોગ કરીને અગર મીડિયામાંથી ત્રણ 12-મીમી-વ્યાસના માયસેલિયલ બ્લોક્સ દૂર કરવામાં આવ્યા હતા અને 250-મિલી એર્લેનમેયર ફ્લાસ્કમાં 50 મિલી વંધ્યીકૃત કલ્ચર માધ્યમ ધરાવતા કોટન પ્લગ સાથે મૂકવામાં આવ્યા હતા (pH 5.0, જેમ કે ઓથમેન એટ અલ દ્વારા અગાઉ વર્ણવેલ છે).20). આ કલ્ચર્સને ૧૮ દિવસ માટે ૨૮°C પર ઉકાળવામાં આવ્યા હતા. ત્યારબાદ કલ્ચર્સને વોટમેન નંબર ૧ ફિલ્ટર પેપર દ્વારા ફિલ્ટર કરવામાં આવ્યા હતા, અને પરિણામી સુપરનેટન્ટ એન્ઝાઇમ સ્ત્રોત તરીકે સેવા આપી હતી.
ABTS ને સબસ્ટ્રેટ તરીકે ઉપયોગ કરીને લેકેસ પ્રવૃત્તિ નક્કી કરવામાં આવી હતી. પ્રતિક્રિયા મિશ્રણ (2 mL) માં 0.3 mM ABTS (0.1 M સોડિયમ સાઇટ્રેટ બફર, pH 4.5 માં ઓગળેલા) નું 500 μL અને નિસ્યંદિત પાણીથી ભળેલ એન્ઝાઇમ નમૂનાની જરૂરી માત્રા હતી.૨૧,૨૨લેકેસ ઓરડાના તાપમાને (28 °C ± 2) ABTS ને ઓક્સિડાઇઝ કરી શકે છે તે ધ્યાનમાં લેતા, ABTS ઓક્સિડેશન 420 nm (ε) પર શોષણમાં વધારો માપીને નક્કી કરવામાં આવ્યું હતું.૪૨૦= ૩૬,૦૦૦ સેમી-1 M -1) એજિલેન્ટ કેરી-100 યુવી સ્પેક્ટ્રોફોટોમીટરનો ઉપયોગ કરીને. પ્રતિ મિનિટ 1 μmol ABTS ઓક્સિડાઇઝ કરવા માટે લેકેસ પ્રવૃત્તિના એક યુનિટની જરૂર હતી. પ્રોટીન સાંદ્રતા બ્રેડફોર્ડ પદ્ધતિ દ્વારા નક્કી કરવામાં આવી હતી, જેમાં બોવાઇન સીરમ આલ્બ્યુમિનનો આંતરિક નિયંત્રણ તરીકે ઉપયોગ કરવામાં આવ્યો હતો.૨૩,૨૪
ઓઇસ્ટર મશરૂમ સ્ટ્રેન NRC 620 માંથી એન્ઝાઇમ મેળવ્યા પછી, તેની પ્રવૃત્તિ 28 °C પર સ્થિર પરિસ્થિતિઓમાં 25 દિવસ માટે વિવિધ ખેતી અંતરાલો પર માપવામાં આવી.
તાપમાનની લેકેસ પ્રવૃત્તિ પર થતી અસરનો અભ્યાસ કરવા માટે, 20 થી 90 °C તાપમાન શ્રેણીમાં પ્રયોગો કરવામાં આવ્યા હતા. એન્ઝાઇમ ઉમેરતા અને પ્રતિક્રિયા શરૂ કરતા પહેલા, બફર (0.1 M સોડિયમ સાઇટ્રેટ, pH 4.5) અને સબસ્ટ્રેટ (ABTS) ને મિશ્રિત કરવામાં આવ્યા હતા અને વિવિધ તાપમાને 5 મિનિટ માટે ઇન્ક્યુબેટ કરવામાં આવ્યા હતા. એન્ઝાઇમ થર્મલ સ્થિરતાનું મૂલ્યાંકન 0.05 M સોડિયમ ફોસ્ફેટ બફર (pH 7.0) માં અનુક્રમે 40, 50, 60 અને 70 °C પર 2 કલાક માટે ઇન્ક્યુબેશન દ્વારા કરવામાં આવ્યું હતું. ત્યારબાદ ABTS સબસ્ટ્રેટનો ઉપયોગ કરીને અવશેષ પ્રવૃત્તિનું મૂલ્યાંકન કરવામાં આવ્યું હતું.
2.5 થી 7.0 ની pH રેન્જવાળા 0.1 M સાઇટ્રેટ-ફોસ્ફેટ બફરમાં ABTS ને સબસ્ટ્રેટ તરીકે ઉપયોગ કરીને લેકેસ પ્રવૃત્તિ પર pH ની અસરનું મૂલ્યાંકન કરવામાં આવ્યું. pH સ્થિરતાનું મૂલ્યાંકન કરવા માટે 0.1 M સાઇટ્રેટ અને ટ્રિસ બફર (pH 3, 4, 6 અને 7) માં બે કલાક માટે એન્ઝાઇમ દ્રાવણને 40°C પર ઇન્ક્યુબેટ કરવામાં આવ્યું. ઇન્ક્યુબેશન પછી સબસ્ટ્રેટ તરીકે ABTS સાથે શેષ પ્રવૃત્તિની ગણતરી કરવામાં આવી.
લેકેસને 10 મિનિટ માટે સોડિયમ ફોસ્ફેટ બફર (0.05 M, pH 7.0) માં વિવિધ ધાતુ આયનો (Mg2+, Cu2+, Co2+, Ca2+, Zn2+, K+, Na+, અને Mn2+) ધરાવતા, અનુક્રમે 2.5 mM અને 10 mM ની સાંદ્રતા પર ઉકાળવામાં આવ્યું. ત્યારબાદ પ્રતિક્રિયા શરૂ કરવા માટે સબસ્ટ્રેટ (ABTS) ઉમેરવામાં આવ્યું, અને સંબંધિત પ્રવૃત્તિનું મૂલ્યાંકન કરવામાં આવ્યું.
ગતિ પરિમાણો (Vmax અને Km) નક્કી કરવા માટે વિવિધ સાંદ્રતા (0.025–3 mM) પર લેકેસ દ્વારા ABTS ઓક્સિડેશન pH 4.5 પર માપવામાં આવ્યું હતું. ગતિસ્થિરાંકોમાઇકલિસ-મેન્ટેન સમીકરણના લાઇનવીવર-બર્ક પ્લોટનો ઉપયોગ કરીને ગણતરી કરવામાં આવી હતી, જે સબસ્ટ્રેટ સાંદ્રતાના કાર્ય તરીકે પ્રતિક્રિયા દરના પારસ્પરિક પ્લોટનું આયોજન કરે છે. ગતિ સ્થિરાંકોની ગણતરી ગ્રાફપેડ પ્રિઝમ સંસ્કરણ 6.01 સોફ્ટવેરનો ઉપયોગ કરીને લાઇનવીવર-બર્ક પ્લોટમાંથી કરવામાં આવી હતી.
સફરજનને નળના પાણીથી સારી રીતે ધોયા પછી, તેમને અડધા ભાગમાં કાપીને સંપૂર્ણપણે સ્વચાલિત બ્રૌન MP80 સફરજનના જ્યુસર (જર્મનીમાં બનેલા) નો ઉપયોગ કરીને રસ કાઢવામાં આવ્યો. રસને ચીઝક્લોથના ચાર સ્તરો દ્વારા ફિલ્ટર કરવામાં આવ્યો. નિયંત્રણ જૂથમાં કોઈ ઉત્સેચકો ઉમેરવામાં આવ્યા ન હતા, જ્યારે તાજા તૈયાર સફરજનના રસમાં 2.0% લેકેસ (સૌથી અસરકારક સાંદ્રતા પરીક્ષણ કરાયેલ) ઉમેરવામાં આવ્યું હતું, જે પછી 4°C પર બે અઠવાડિયા માટે સંગ્રહિત કરવામાં આવ્યું હતું.
ટાઇટ્રેટેબલ એસિડિટી (TA) અને pH બાઉલ્ટન એટ પદ્ધતિ અનુસાર નક્કી કરવામાં આવ્યા હતા.અ.૨૭. દરેક નમૂનાનો pH ડિજિટલ pH મીટર (JENWAY 3510 pH મીટર) નો ઉપયોગ કરીને માપવામાં આવ્યો હતો. ટાઇટ્રેટેબલ એસિડિટી (TA) ની ગણતરી નીચેના સૂત્રનો ઉપયોગ કરીને મેલિક એસિડના આધારે કરવામાં આવી હતી.
જ્યાં V અને C એ અનુક્રમે ટાઇટ્રેશનમાં વપરાતા સોડિયમ હાઇડ્રોક્સાઇડ દ્રાવણનું વોલ્યુમ (mL) અને સાંદ્રતા (0.1 mol/L) છે. K એ મેલિક એસિડ રૂપાંતર ગુણાંક છે, જે 0.067 ની બરાબર છે, અને W એ સફરજનના રસનું દળ (g) છે.
કુલ દ્રાવ્ય ઘન પદાર્થો (ટીડીએસ) બધા જ્યુસ સેમ્પલની સામગ્રી PAL-1 પોકેટ રિફ્રેક્ટોમીટર (ATAGO, ટોક્યો, જાપાન) નો ઉપયોગ કરીને નક્કી કરવામાં આવી હતી. દરેક માપન પછી, ઓપ્ટિકલ લેન્સને ડીઆયોનાઇઝ્ડ પાણીથી ધોઈ નાખવામાં આવ્યો હતો, અને દરેક સફરજનના રસના નમૂનાનું ત્રણ વખત પરીક્ષણ કરવામાં આવ્યું હતું. દરેક નમૂનાનું મૂલ્ય ત્રણ માપનો સરેરાશ કરીને ગણવામાં આવ્યું હતું. દરેક સફરજનના રસના નમૂના માટે સરેરાશ ± પ્રમાણભૂત વિચલન પણ આ પરિણામોની સરેરાશ કરીને ગણવામાં આવ્યું હતું.
સફરજનના રસના નમૂનાઓની વિસ્કોઇલાસ્ટીસીટીનું મૂલ્યાંકન રોટેશનલ વિસ્કોમીટર (RV, રિઓટેસ્ટ 2, જર્મની) નો ઉપયોગ કરીને કરવામાં આવ્યું હતું. નમૂનાને વિસ્કોમીટરના "S2" સિલિન્ડરની અંદર મૂકવામાં આવ્યો હતો. દેખીતી સ્નિગ્ધતા શીયર સ્ટ્રેસ વિરુદ્ધ શીયર રેટ કર્વના ઢાળ દ્વારા દર્શાવવામાં આવી હતી, જે શીયર સ્ટ્રેસ અને વિવિધ શીયર રેટ (1.00 થી 437.4 s⁻¹ સુધી) પર અનુરૂપ વણાંકો પરથી ગણતરી કરવામાં આવી હતી. દેખીતી સ્નિગ્ધતાની ગણતરી માટેનું સૂત્ર નીચે મુજબ છે:
જ્યાં η એ સ્પષ્ટ સ્નિગ્ધતા (cP) છે, τ એ શીયર સ્ટ્રેસ (dyn/cm²) છે, γ એ શીયર રેટ (sec⁻¹) છે, અને (τ) ની ગણતરી નીચેના સૂત્રનો ઉપયોગ કરીને ટોર્ક (α) અને સિલિન્ડર (Z) મૂલ્યોનો ઉપયોગ કરીને કરવામાં આવે છે: τ = Z . α.
બ્રાઉનિંગ ઇન્ડેક્સ મીડાવ એટ પદ્ધતિ અનુસાર નક્કી કરવામાં આવ્યો હતોઅ.29. ૧૦ મિલી રસના નમૂનાને ૧૦ મિનિટ માટે ૨૭૫૦ xg પર સેન્ટ્રીફ્યુજ કરવામાં આવ્યું. ૫ મિલી રસ સુપરનેટન્ટને ૫ મિલી ૯૫% ઇથેનોલ સાથે ભેળવવામાં આવ્યું. શિમાડઝુ યુવી સ્પેક્ટ્રોફોટોમીટર (યુવી-૧૬૦૧ પીસી) નો ઉપયોગ કરીને મિશ્રણનું શોષણ ૪૨૦ એનએમ માપવામાં આવ્યું.
બાઉલ્ટન એટ અલ દ્વારા વર્ણવ્યા મુજબ ફોલિન-સિઓકાલ્ટેયુ રીએજન્ટનો ઉપયોગ કરીને કુલ ફિનોલિક સામગ્રી (TPC) રંગમેટ્રિક રીતે નક્કી કરવામાં આવી હતી.[27]]. 0 થી 500 mg/L ની સાંદ્રતા માટે ગેલિક એસિડનો એક પ્રમાણભૂત વળાંક બનાવવામાં આવ્યો હતો (રૂ.= 0.997). પરિણામો ગેલિક એસિડ સમકક્ષ (mg GAE/mL) તરીકે વ્યક્ત કરવામાં આવે છે.
25 μL સફરજનના રસમાં 125 μL નિસ્યંદિત પાણી અને 2850 μL FRAP દ્રાવણ ઉમેરો અને મિશ્રણને અંધારામાં છોડી દો.30ઓછામાં ઓછું. પછી શિમાડઝુ યુવી સ્પેક્ટ્રોફોટોમીટર (UV-1601 PC) નો ઉપયોગ કરીને 593 nm પર શોષણ માપો. FRAP રીએજન્ટ 300 mM એસિટેટ બફર (pH 3.6), 20 mM આયર્ન(III) ક્લોરાઇડ અને 10 mM 2,4,6-tris(2-pyridyl)triazine (TPTZ) (40 mM HCl માં ઓગળેલા) ને 10:1:1 ના ગુણોત્તરમાં ભેળવીને તૈયાર કરવામાં આવ્યું હતું. ટ્રોલોક્સને માનક તરીકે ઉપયોગ કરીને એક માનક વળાંક બનાવવામાં આવ્યો હતો (રૂ.= 0.999), અને પરિણામો μM ટ્રોલોક્સ/mL તરીકે દર્શાવવામાં આવે છે.
DPPH મુક્ત રેડિકલને દૂર કરવાની તેમની ક્ષમતાનું મૂલ્યાંકન કરવા માટે DPPH પદ્ધતિનો ઉપયોગ કરીને સારવાર કરાયેલા અને સારવાર ન કરાયેલા રસની એન્ટીઑકિસડન્ટ પ્રવૃત્તિ નક્કી કરવામાં આવી હતી.31મિથેનોલમાં 1 મિલી DPPH દ્રાવણ (100 μM) સાથે દસ માઇક્રોલિટર રસ ભેળવવામાં આવ્યો. 30 મિનિટ સુધી અંધારામાં પ્રતિક્રિયા પછી, શિમાડઝુ યુવી સ્પેક્ટ્રોફોટોમીટર (UV-1601 PC) નો ઉપયોગ કરીને મિશ્રણનું શોષણ 517 nm માપવામાં આવ્યું. પરિણામો કેલિબ્રેશન વળાંક (R2= ૦.૯૯૦).
પ્રાપ્ત માહિતી દર્શાવે છે કે આથો લાવવાના 18મા દિવસના અંત સુધીમાં NRC 620 ઓઇસ્ટર મશરૂમ્સમાં મહત્તમ લેકેસ ઉત્પાદન જોવા મળ્યું હતું, જે 1302 U/L ની પ્રવૃત્તિ સુધી પહોંચ્યું હતું. આ લેકેસ ઉત્પાદન માટે શ્રેષ્ઠ ખેતી સમય નક્કી કરવા માટેનો આધાર હતો (આકૃતિ 1). જોકે વધતા ખેતી સમય સાથે ઉત્સેચક ઉત્પાદનમાં વધારો થયો હતો, પરંતુ વૃદ્ધિ દર ખેતી સમયના સીધા પ્રમાણસર નહોતો; 21 દિવસ પછી, ઉત્સેચક પ્રવૃત્તિમાં માત્ર 90 U/L (1390 U/L) નો વધારો થયો હતો. તેથી, વધેલા ખેતી સમયના આર્થિક લાભો સાથે ઉત્પાદન ઉપજને સંતુલિત કરવા માટે આખરે 18 દિવસને શ્રેષ્ઠ ખેતી સમય તરીકે પસંદ કરવામાં આવ્યો હતો.
પ્લ્યુરોટસ ઓસ્ટ્રીટસ NRC 620 માં લેકેસ ઉપજ પર ખેતીના સમયની અસર. ત્રણ (12 મીમી) ફૂગના માયસેલિયલ બ્લોક્સને 50 મિલી જંતુરહિત માધ્યમમાં ઇનોક્યુલેટ કરવામાં આવ્યા હતા અને પછી 28 °C પર અલગ અલગ સમય માટે સંવર્ધન કરવામાં આવ્યું હતું.
અન્ય અભ્યાસો સાથે સુસંગત, અમારા પરિણામો સૂચવે છે કે ફૂગ દ્વારા લેકેસ સ્ત્રાવની ટોચ પ્રાપ્ત કરવા માટે આદર્શ સંસ્કૃતિ સમયગાળો 7 થી 36 દિવસની વચ્ચે હોવાની શક્યતા છે.32એઝીક અને અન્ય લોકોના મતે.33, *ટ્રેમેટીસ પોલીઝોના* WRF03 એ આથોના નવમા દિવસના અંત સુધીમાં સૌથી વધુ માત્રામાં લેકેસ ઉત્પન્ન કર્યું, જેમાં 1637 U/mg પ્રોટીનની ચોક્કસ પ્રવૃત્તિ હતી. વધુમાં, ઓથમેન એટ અલ.34જાણવા મળ્યું કે *ટ્રાઇકોડર્મા હર્ઝિયાનમ* S7113 એ કલ્ચરના પાંચમા દિવસે મોટી માત્રામાં લેકેસ સ્ત્રાવ કર્યો હતો. લેકેસ ઉત્પાદન દર ચૌદમા દિવસે ટોચની પ્રવૃત્તિ પર પહોંચ્યો અને પછી ધીમે ધીમે ઘટ્યો.34જોકે મુખ્ય વૃદ્ધિ તબક્કા દરમિયાન પણ ઉત્સેચક સ્ત્રાવ થઈ શકે છે, તે સામાન્ય રીતે મધ્યવર્તી તબક્કા દરમિયાન ટોચ પર પહોંચે છે અને કાર્બન અથવા નાઇટ્રોજન સ્ત્રોતના વપરાશ દ્વારા ઉશ્કેરવામાં આવે છે.૩૪,૩૫
જોકે પ્લ્યુરોટસ ઓસ્ટ્રીટસ NRC 620 ના લેકેસે 50°C થી 80°C સુધીના વિશાળ તાપમાન શ્રેણીમાં ઉચ્ચ પ્રવૃત્તિ દર્શાવી હતી, જે ટોચની પ્રવૃત્તિ (69-98%) ની નજીક હતી, તેની મહત્તમ પ્રવૃત્તિ 70°C (આકૃતિ 2a) પર જોવા મળી હતી. આ તાપમાન શ્રેણીની બહાર, ઉત્સેચક પ્રવૃત્તિ આશરે 70°C પર ઘટી હતી. આ પરિણામો સૂચવે છે કે ઉત્સેચક ઊંચા તાપમાને સક્રિય હોય છે, સંભવતઃ કારણ કે ઉચ્ચ તાપમાન પ્રતિક્રિયાની ગતિ ઊર્જામાં વધારો કરે છે.
*પ્લ્યુરોટસ ઓસ્ટ્રીટસ* NRC 620 માં લેકેસ પ્રવૃત્તિ પર પ્રતિક્રિયા તાપમાન (a) અને pH (b) ની અસર. એન્ઝાઇમ ઉમેરતા અને પ્રતિક્રિયા શરૂ કરતા પહેલા 5 મિનિટ માટે મિશ્રણને અલગ અલગ તાપમાને પૂર્વ-ઉષ્મા આપીને 20 થી 90 °C સુધીનું તાપમાન પ્રાપ્ત કરવામાં આવ્યું હતું. 2.5 થી 7.0 ની pH શ્રેણીમાં 0.1 M સાઇટ્રેટ-ફોસ્ફેટ બફર ધરાવતા દ્રાવણમાં ABTS ને સબસ્ટ્રેટ તરીકે ઉપયોગ કરીને લેકેસ પ્રવૃત્તિ પર pH ની અસરનું મૂલ્યાંકન કરવામાં આવ્યું હતું.
એઝાઇક અને અન્ય લોકોના મતેઅન્ય.33, *ટ્રેમેટીસ પોલીઝોના* WRF03 લેકેસ માટે શ્રેષ્ઠ તાપમાન 55 °C છે, જે *ગેનોડર્મા લ્યુસિડમ* માટે સમાન છે.લેકેસ36અને *ટ્રેમેટીસ પોલીઝોના* KU-RNW02737 માટે શ્રેષ્ઠ તાપમાન (50 °C) જેવું જલૈકેસ . બાલ્ડ્રિયન38નોંધે છે કે, અન્ય લિગ્નિન-ડિગ્રેડિંગ એન્ઝાઇમ સિસ્ટમ્સની જેમ, લેકેસ માટે આદર્શ તાપમાન શ્રેણી 50 અને 70 °C ની વચ્ચે છે.
પરિણામો દર્શાવે છે કે ઉત્સેચકે pH 3.0 પર સૌથી વધુ પ્રવૃત્તિ દર્શાવી હતી, જે pH 3.5 પર 94% પ્રવૃત્તિ સુધી પહોંચી હતી. જો કે, તે 2.5 થી 7.0 (આકૃતિ 2b) સુધીની વિશાળ pH શ્રેણીમાં સક્રિય રહ્યું. વધુમાં, તે તટસ્થ અથવા આલ્કલાઇન પરિસ્થિતિઓની તુલનામાં એસિડિક પરિસ્થિતિઓમાં વધુ પ્રવૃત્તિ દર્શાવે છે. તેની પ્રવૃત્તિ 2.5 થી 4.5 સુધીની pH શ્રેણીમાં ઓછામાં ઓછી 77% રહી, પરંતુ pH 7.0 પર ફક્ત આશરે 38% સુધી પહોંચી. *Trametes polyzona* WRF03 માંથી laccase માટે શ્રેષ્ઠ pH 4.533 હતો, જે *Trametes polyzona* KU-RNW02737, *Trichoderma harzanium* 39, *Pleurotus* sp. 40, અને *Trametes hirsuta* 41 માંથી laccases માટે pH સમાન છે. જોકે, Chairin et al દ્વારા કરવામાં આવેલા અભ્યાસ મુજબ.42, *પોલીમોર્ફા f. sp.* WR710-1 માંથી લેકેસ માટે શ્રેષ્ઠ pH 2.2 છે, જ્યારે *પોલીમોર્ફા f. sp.* IBL-04 માંથી લેકેસ માટે શ્રેષ્ઠ pH 5.043 છે. T2/T3 લેકેસના કોપર અણુઓ સાથે હાઇડ્રોક્સાઇડ આયન (લેકેસ અવરોધક) નું બંધન તટસ્થ અથવા આલ્કલાઇન pH પરિસ્થિતિઓમાં લેકેસ પ્રવૃત્તિમાં ઘટાડો થવાનું કારણ હોઈ શકે છે. આ T1 કેન્દ્રથી T2/T3 કેન્દ્રમાં આંતરિક ઇલેક્ટ્રોન ટ્રાન્સફરને વિક્ષેપિત કરી શકે છે, જેનાથીમર્યાદિતઉત્સેચક પ્રવૃત્તિ23,44
જુદા જુદા તાપમાને એન્ઝાઇમને ઇન્ક્યુબેશન કરીને, એવું જાણવા મળ્યું કે ઇન્ક્યુબેશન સમય અને તાપમાન બંને એન્ઝાઇમ સ્થિરતાને અસર કરે છે. નોંધનીય છે કે, *ટ્રેમેટેસ પોલીઝોના* NRC 620 ના લેકેસે 40℃ અને 50℃ પર ઉચ્ચ સ્થિરતા દર્શાવી, 120 મિનિટ પછી તેની પ્રારંભિક પ્રવૃત્તિના અનુક્રમે 68.33% અને 59.61% જાળવી રાખ્યા (આકૃતિ 3a). તેનાથી વિપરીત, સમાન પરિસ્થિતિઓમાં (40℃ અને 50℃, 120 મિનિટ), *ટ્રેમેટેસ પોલીઝોના* WRF03 ના લેકેસે તેની પ્રવૃત્તિના અનુક્રમે 64.38% અને 42.92% જાળવી રાખ્યા.33તેનાથી વિપરીત, ઇન્ક્યુબેશન સમય અને તાપમાનમાં વધારો થવાથી *ટ્રેમેટીસ પોલીઝોના* NRC 620 લેકેસની સ્થિરતામાં ઘટાડો થયો; 60℃ અને 70℃ પર 60 મિનિટ માટે ઇન્ક્યુબેશન પછી, તેની પ્રવૃત્તિ અનુક્રમે 39.24% અને 1.72% થઈ ગઈ (આકૃતિ 3a). પ્રાયોગિક પરિણામો સાથે સુસંગત, *ટ્રેમેટીસ પોલીઝોના* WRF03 ના લેકેસે થર્મલ ટ્રીટમેન્ટ પ્રક્રિયા દરમિયાન 40 અને 50℃ પર ઉચ્ચ સ્થિરતા દર્શાવી.33એ જ રીતે, લુએંગજારોએનકિટ વગેરેઅ.૩૭અને ચેરિન એટઅ.૪૨1 કલાક માટે અનુક્રમે 50 °C તાપમાને ટ્રેમેટેસ પોલિઝોના KURNW027 અને ટ્રેમેટેસ પોલિઝોના WR710-1 માંથી લેકેસીસની સ્થિરતાનો અહેવાલ આપ્યો. વિવિધ બાયોટેકનોલોજીકલ ક્ષેત્રોમાં લાગુ પડતા ઉપયોગી બાયોકેટાલિસ્ટ તરીકે, લેકેસમાં વિશાળ તાપમાન શ્રેણીમાં સારી સ્થિરતા અને કામગીરી હોવી જોઈએ.
*પ્લ્યુરોટસ ઓસ્ટ્રીટસ* NRC 620 માંથી લેકેસની થર્મોસ્ટેટિક સ્થિરતા (a) અને pH સ્થિરતા (b). થર્મોસ્ટેટિક સ્થિરતાનું મૂલ્યાંકન 0.05 M સોડિયમ ફોસ્ફેટ બફર (pH 7.0) માં અનુક્રમે 40, 50, 60 અને 70 °C પર 2 કલાક માટે એન્ઝાઇમ દ્રાવણને ઇન્ક્યુબેટ કરીને કરવામાં આવ્યું હતું. pH સ્થિરતાનું મૂલ્યાંકન 0.1 M સાઇટ્રેટ બફર અને ટ્રિસ બફર (pH 3, 4, 6 અને 7) માં 40 °C પર 2 કલાક માટે એન્ઝાઇમ દ્રાવણને ઇન્ક્યુબેટ કરીને કરવામાં આવ્યું હતું. ઇન્ક્યુબેશન પછી સબસ્ટ્રેટ તરીકે ABTS નો ઉપયોગ કરીને શેષ પ્રવૃત્તિની ગણતરી કરવામાં આવી હતી.
એન્ઝાઇમના ઉપયોગ અને સંગ્રહ માટે શ્રેષ્ઠ પરિસ્થિતિઓ નક્કી કરવા માટે, અમે લેકેસ સ્થિરતા પર pH ની અસરની તપાસ કરી. વિવિધ pH મૂલ્યોના સંપર્કમાં આવવાથી પ્રોટીન રચનાની સ્થિરતા પર નોંધપાત્ર અસર પડી, જેનાથી એન્ઝાઇમ પરમાણુની સ્થિરતા અને પ્રવૃત્તિ પર અસર પડી. પરિણામો દર્શાવે છે કે એસિડિક પરિસ્થિતિઓમાં એન્ઝાઇમ ઓછું સ્થિર હતું, જ્યારે તે ઉચ્ચ pH મૂલ્યો (તટસ્થ અને આલ્કલાઇન પ્રદેશો) પર વધુ સારી સ્થિરતા દર્શાવે છે. 7.0, 6.0, 4.0 અને 3.0 ના pH મૂલ્યો પર, 120 મિનિટ પછી એન્ઝાઇમ રીટેન્શન દર અનુક્રમે આશરે 100%, 62.54%, 52.39% અને 11.14% હતા (આકૃતિ 3b). *સ્ટ્રોમ્બસ મલ્ટિસસ* WRF03 લેકેસે તટસ્થ pH મૂલ્યો (5.5–6.5) પર ઉચ્ચ સ્થિરતા અને એસિડિક pH મૂલ્યો (4.0 ની નીચે) પર ઓછી સ્થિરતા દર્શાવી. ૫.૫, ૬.૦ અને ૬.૫ ના pH મૂલ્યો પર ૧૨૦ મિનિટ પછી, એન્ઝાઇમ રીટેન્શન દર અનુક્રમે આશરે ૮૨%, ૧૦૦% અને ૯૩% હતો.33ખૈરિન વગેરે.42નોંધ્યું કે ટ્રેમેટેસ પોલીઝોના WR710-1 માંથી લેકેસ 6.0 થી 7.0 ની pH રેન્જમાં સ્થિર હતું, જ્યારે સૈયદ અને અન્યોએ.45દર્શાવે છે કે તટસ્થ pH પરિસ્થિતિઓમાં લેકેસ વધુ સ્થિર હતું. જોકે, સેરેના યુનિકલરના લેકેસે પણ આલ્કલાઇન પરિસ્થિતિઓમાં સ્થિરતા દર્શાવી હતી (pH 9.0)46. અભ્યાસ કરાયેલા લેકેસે વિશાળ pH શ્રેણીમાં ઉચ્ચ સ્થિરતા દર્શાવી હતી. ઔદ્યોગિક ઉપયોગો માટે આ એક મહત્વપૂર્ણ લાક્ષણિકતા હોઈ શકે છે.
કેટલાક ધાતુ આયનોમાં ઉત્સેચક પ્રવૃત્તિ પર ઉત્તેજક અને અવરોધક બંને અસરો હોય છે, તેથી ઔદ્યોગિક ઉપયોગોમાં ઉત્સેચક પ્રવૃત્તિ પર તેમની અસરો ધ્યાનમાં લેવી જોઈએ. આ મહત્વપૂર્ણ છે કારણ કે ધાતુ આયનો સામાન્ય પર્યાવરણીય દૂષકો છે જે બાહ્યકોષીય ઉત્સેચકોની સ્થિરતા અને સંશ્લેષણને અસર કરી શકે છે.47*Pleurotus ostreatus* NRC 620 માંથી લેકેસ પર બહુવિધ ધાતુ આયનોની અસરોની તપાસ કરવા માટે, અમે અનુરૂપ પ્રયોગો કર્યા. આકૃતિ 4 માં બતાવ્યા પ્રમાણે, વપરાયેલી ધાતુના પ્રકાર પર આધાર રાખીને, ધાતુ આયન સાંદ્રતા 2.5 mM થી 10 mM સુધી વધારવાથી એન્ઝાઇમ કાર્ય પર નકારાત્મક અસર પડી. ઉદાહરણ તરીકે,મેગ્નેટિક ²⁺ , કો²⁺ , ઝેડએન²⁺, અનેકુ²⁺ઉત્સેચક પ્રવૃત્તિને ઉત્તેજીત અને સક્રિય કરી શકે છે, જ્યારેના⁺ , મેગ્નેટ⁺ , Ca²⁺, અનેકે⁺એન્ઝાઇમ પ્રવૃત્તિને અવરોધી શકે છે. 10 mM ની સાંદ્રતા પર, *Pleurotus ostreatus* NRC 620 માંથી Cu²⁺ અને Mg²⁺ આયનો લેકેસ પ્રવૃત્તિના સૌથી શક્તિશાળી સક્રિયકર્તા હતા, જે અનુક્રમે આશરે 34% અને 20% ની સક્રિયકરણ ડિગ્રી પ્રદાન કરે છે. જો કે, 10 mM ની સાંદ્રતા પર, Ca²⁺ આયનો લેકેસના સૌથી શક્તિશાળી અવરોધક હતા, જે એન્ઝાઇમ પ્રવૃત્તિને લગભગ 60% ઘટાડે છે.
પ્લ્યુરોટસ ઓસ્ટ્રીટસ NRC 620 લેકેસની પ્રવૃત્તિ પર ધાતુના આયનોની અસર. લેકેસને 2.5 mM અને 10 mM ની સાંદ્રતા પર વિવિધ ધાતુના આયનો ધરાવતા સોડિયમ ફોસ્ફેટ બફર (0.05 M, pH 7.0) માં 10 મિનિટ માટે ઇન્ક્યુબેટ કરવામાં આવ્યું હતું. ત્યારબાદ સબસ્ટ્રેટ (ABTS) ના ઉમેરા દ્વારા પ્રતિક્રિયા શરૂ કરવામાં આવી હતી, ત્યારબાદ સંબંધિત પ્રવૃત્તિ માપવામાં આવી હતી.
અમારા પરિણામો અન્ય લેખકોના પરિણામો સાથે સુસંગત છે જેમણે શોધી કાઢ્યું હતું કે Mg²⁺ અને Cu²⁺ *Trametes polyzona* WRF03³ ની પ્રવૃત્તિમાં વધારો કરે છે. Castaño et al.⁴⁸ એ શોધી કાઢ્યું હતું કે *Xylaria* sp. માંથી laccase અમુક અંશે કોપર આયનો (Cu²⁺) દ્વારા ઉત્તેજિત થાય છે. વધુમાં, Foroutanfar et al.⁴⁹ અને Si et al.⁵⁰ એ અનુક્રમે *Paraconiothyrium variabile* અને *Trametes pubescens* ના laccases પર સમાન અભ્યાસ હાથ ધર્યા હતા. આ એન્ઝાઇમના પ્રકાર II કોપર-બંધનકર્તા સ્થળ (T2) ને આપેલ સાંદ્રતા પર Cu²⁺ સાથે સંતૃપ્ત કરી શકાય છે, જે ઉચ્ચ Cu²⁺³⁹ સાંદ્રતા પર laccase પ્રવૃત્તિના ઉત્તેજનાને સમજાવી શકે છે. સફેદ સડો ફૂગ લેકેસીસ એ બહુવિધ કોપર પરમાણુઓ ધરાવતા ઓક્સિડેઝ હોવાથી, લેકેસીસ પ્રવૃત્તિ પર કોપર આયનોની અસરો વૈવિધ્યસભર હોય છે અને ઉત્તેજક અને અવરોધકથી લઈને તટસ્થ સુધીની હોય છે.⁵¹ તેનાથી વિપરીત, ઝોઉ એટ અલ.. [52]અહેવાલ આપ્યો કેકુ²⁺તાઇવાન ભૂગર્ભીય ઉધઈ (ઓડોન્ટોટર્મ્સ ફોર્મોસેનસ) ની લેકેસ પ્રવૃત્તિને અટકાવી. જોકે, સેરેના sp. HYB07 ના લેકેસ[53]અને ક્લિટોસાયબ મેક્સિમા[54]કોપર આયનોથી પ્રભાવિત નહોતા.
સબસ્ટ્રેટ વિશિષ્ટતા તેના ગતિ પરિમાણો (Km અને Vmax) દ્વારા દર્શાવવામાં આવી હતી; સબસ્ટ્રેટનું એન્ઝાઇમ સાથે બંધનકર્તા આકર્ષણ જેટલું મજબૂત હશે, Km મૂલ્ય ઓછું હશે અને સબસ્ટ્રેટ વિશિષ્ટતા એટલી જ ઊંચી હશે.૩,૨૧,૫૫*પ્લ્યુરોટસ ઓસ્ટ્રીટસ* NRC 620 માંથી લેકેસના ગતિ પરિમાણો (Km અને Vmax) ગ્રાફપેડ પ્રિઝમ 6.0 સોફ્ટવેરનો ઉપયોગ કરીને લાઈનવીવર-બર્ક પ્લોટ (આકૃતિ 5) દ્વારા નક્કી કરવામાં આવ્યા હતા. ABTS ને સબસ્ટ્રેટ તરીકે ઉપયોગ કરતી વખતે, પરિણામો 1.99 mM અને 16217 μmol હતા.ન્યૂનતમ⁻¹ લ⁻¹,અનુક્રમે. એલસાયદ અને અન્ય.21અહેવાલ આપ્યો છે કે ABTS ઓક્સિડેશન માટે Km મૂલ્યો અનુક્રમે 0.1 mM અને 0.064 mM હતા, જે ABTS માટે Lac A અને Lac B આઇસોએન્ઝાઇમ્સનું ઉચ્ચ આકર્ષણ દર્શાવે છે. વધુમાં, Vmax મૂલ્યો 0.182 μmol હતા.ન્યૂનતમ⁻¹અને 0.603 μmolન્યૂનતમ⁻¹અનુક્રમે. પ્રાપ્ત કિમી મૂલ્ય ટ્રેમેટેસ પોલીઝોના WRF03 (8.66 mM) કરતા ઓછું હતું; વધુમાં, તેમનું Vmax મૂલ્ય (1429 mmol min⁻¹) પણ હતુંનીચુંABTS નો સબસ્ટ્રેટ તરીકે ઉપયોગ કરતી વખતે.33 એ જ રીતે, લેન્ટિનસ સ્ક્વેરોસ્યુલસ MR13 અને ટ્રેમેટેસ sp. AH28-2 લેકેસ સાંદ્રતાના Km મૂલ્યો અનુક્રમે 0.0714 mM અને 0.025 mM હતા, અને Vmax મૂલ્યો 0.0091 mM min−1 અને 0.67 mM min−1 mg−1 (ABTS ની તુલનામાં) હતા.અનુક્રમે.56,57
*પ્લ્યુરોટસ ઓસ્ટ્રીટસ* NRC 620 માંથી લેકેસની પ્રવૃત્તિ પર ABTS સાંદ્રતાની અસરની તપાસ કરવામાં આવી હતી, અને ABTS સાંદ્રતા વિરુદ્ધ પ્રારંભિક પ્રતિક્રિયા વેગના પારસ્પરિકનો લાઇનવીવર-બર્ક પ્લોટ બનાવવામાં આવ્યો હતો. ગતિ પરિમાણો (Vmax અને Km) નક્કી કરવા માટે લેકેસની વિવિધ સાંદ્રતા (0.025–3.0 mM) સાથે ABTS ની ઓક્સિડેશન પ્રતિક્રિયા pH 4.5 પર માપવામાં આવી હતી. માઇકલિસ-મેન્ટેન ગતિ સ્થિરાંકોની ગણતરી સબસ્ટ્રેટ સાંદ્રતા વિરુદ્ધ પ્રતિક્રિયા વેગના પારસ્પરિકના લાઇનવીવર-બર્ક પ્લોટનો ઉપયોગ કરીને કરવામાં આવી હતી. ગ્રાફપેડ પ્રિઝમ 6.01 સોફ્ટવેરનો ઉપયોગ કરીને લાઇનવીવર-બર્ક પ્લોટમાંથી ગતિ સ્થિરાંકોની ગણતરી કરવામાં આવી હતી.
પરંપરાગત સ્પષ્ટીકરણ ઉત્સેચકો, જેમ કે પેક્ટીનેઝ, પેક્ટીક પદાર્થોનું હાઇડ્રોલાઇઝેશન કરે છે, સ્નિગ્ધતા અને ટર્બિડિટી ઘટાડે છે. તેઓ અસરકારક રીતે માળખાકીય પોલિસેકરાઇડ્સને તોડી નાખે છે અને ઘણીવાર ઉપજ અને સ્પષ્ટતા સુધારવા માટે સેલ્યુલેસ અને હેમીસેલ્યુલેસ જેવા અન્ય ઉત્સેચકો સાથે સંયોજનમાં ઉપયોગમાં લેવાય છે. જોકે, પેક્ટીનેઝ ખાસ કરીને ફિનોલિક સંયોજનોને લક્ષ્ય બનાવતા નથી, જે ટર્બિડિટી અને ઓક્સિડેટીવ બ્રાઉનિંગમાં મુખ્ય ફાળો આપે છે, ખાસ કરીને સફરજન અને દ્રાક્ષના રસ જેવા રસમાં.58તેનાથી વિપરીત, લેકેસીસ ફિનોલિક સંયોજનોના ઓક્સિડેશનને ઉત્પ્રેરિત કરે છે, તેમને મોટા, અદ્રાવ્ય અણુઓમાં પોલિમરાઇઝ કરે છે જેને સેડિમેન્ટેશન અથવા ગાળણ દ્વારા દૂર કરી શકાય છે. આ પદ્ધતિ માત્ર સ્પષ્ટતામાં સુધારો કરતી નથી પણ ફિનોલિક સંયોજનોને કારણે ઓક્સિડેટીવ બ્રાઉનિંગની શક્યતા ઘટાડીને રસના શેલ્ફ લાઇફને પણ લંબાવે છે. વધુમાં, લેકેસીસ-આધારિત સ્પષ્ટીકરણ પ્રક્રિયાઓ હળવી પ્રક્રિયા પરિસ્થિતિઓ (pH 3.5–5.5, તાપમાન 25–40 °C) હેઠળ હાથ ધરવામાં આવી શકે છે, જે તેમને તેમના પોષક અથવા ઓર્ગેનોલેપ્ટિક ગુણધર્મો સાથે સમાધાન કર્યા વિના નાજુક રસ માટે યોગ્ય બનાવે છે.59અભ્યાસોએ દર્શાવ્યું છે કે પેક્ટીનેઝ ટ્રીટમેન્ટ 1-2 કલાકમાં રસને સ્પષ્ટ કરી શકે છે, જ્યારે લેકેસ ટ્રીટમેન્ટમાં સામાન્ય રીતે ફેનોલિક સંયોજનોને સંપૂર્ણપણે ઘટાડવા માટે લાંબો પ્રતિક્રિયા સમય (3-6 કલાક) જરૂરી છે. જો કે, આ પ્રક્રિયાને એન્ઝાઇમને સ્થિર કરીને અથવા યાંત્રિક સ્પષ્ટીકરણ પદ્ધતિઓ સાથે લેકેસને જોડીને ઑપ્ટિમાઇઝ કરી શકાય છે.60આ અભ્યાસમાં, ક્રૂડ અર્કના એન્ઝાઇમ પ્રોફાઇલિંગમાં નોંધપાત્ર લેકેસ અને α-એમીલેઝ પ્રવૃત્તિઓ જોવા મળી, જ્યારે પેક્ટીનેઝ અને ઝાયલેનેઝ પ્રવૃત્તિઓ અત્યંત ઓછી હતી, અને સેલ્યુલેઝ પ્રવૃત્તિ શોધી શકાઈ ન હતી. તેથી, ટર્બિડિટી અને ફેનોલિક સામગ્રીમાં ઘટાડો મુખ્યત્વે લેકેસની ક્રિયાને કારણે હતો, જ્યારે સ્નિગ્ધતામાં ફેરફાર આંશિક રીતે એમીલેઝની ક્રિયાને કારણે હોઈ શકે છે.
કોષ્ટક 1 તાજા સ્ક્વિઝ્ડ સફરજનના રસ અને લેકેસ-ટ્રીટેડ નમૂનાઓના ભૌતિક-રાસાયણિક પરિમાણો દર્શાવે છે. પરિણામો દર્શાવે છે કે તાજા સ્ક્વિઝ્ડ સફરજનના રસનું ઉત્પાદન (71.59%) લેકેસ-ટ્રીટેડ નમૂનાઓ (87.34%) કરતા ઓછું હતું. આ પરિણામો પિલ્નિક અને ઓરેન્જના તારણો સાથે સુસંગત છે.61, જેમણે સૂચવ્યું હતું કે ફળોની પ્રક્રિયામાં ઉત્સેચકોનો ઉપયોગ રસની ઉપજમાં વધારો કરી શકે છે, ગાળણક્રિયામાં સુધારો કરી શકે છે અને સાંદ્રતા માટે ઉચ્ચ-ગુણવત્તાવાળા, સ્પષ્ટ રસ મેળવી શકે છે. રસની ઉપજમાં વધારો મુખ્યત્વે રસમાં દ્રાવ્ય શર્કરાની સામગ્રીમાં વધારો થવાને કારણે થાય છે. ફળોના એન્ઝાઇમેટિક હાઇડ્રોલિસિસ દરમિયાન, ઉત્પાદનની કોષ દિવાલોમાં મેસોગ્લીઆ અને પેક્ટીન નાશ પામે છે અને તટસ્થ શર્કરા અને એસિડ જેવા દ્રાવ્ય પદાર્થોમાં રૂપાંતરિત થાય છે.૬૨.એન્ઝાઇમ-ટ્રીટેડ સફરજનના રસનું pH મૂલ્ય નિયંત્રણ જૂથ (P < 0.05) કરતા નોંધપાત્ર રીતે ઓછું હતું, અને સંગ્રહ દરમિયાન બંને જૂથોનું pH મૂલ્ય નોંધપાત્ર રીતે વધ્યું (કોષ્ટક 1). આ પરિણામો માર્ક એટ અલના પરિણામો સાથે સુસંગત છે.63, જેમણે નોંધ્યું હતું કે ગરમીની સારવાર પછી સંગ્રહ પછી કાજુના રસનું pH ઘટ્યું. એન્ઝાઇમ સારવાર પછી પેક્ટીન ડિગ્રેડેશન અને ગેલેક્ટ્યુરોનિક એસિડનું નિર્માણ સંગ્રહ દરમિયાન pH માં વધારો માટે જવાબદાર હોઈ શકે છે. એન્ઝાઇમ-ટ્રીટેડ નમૂનાઓનું pH સંગ્રહ દરમિયાન 4.05 અને 4.31 ની વચ્ચે રહ્યું, જ્યારે સારવાર ન કરાયેલ સફરજનના રસનું pH 4.12 અને 4.33 ની વચ્ચે રહ્યું.
સારવાર ન કરાયેલ અને લેકેસ-ટ્રીટેડ બંને નમૂનાઓની કુલ એસિડિટી (TA) માં સંગ્રહ સમય વધવા સાથે ઘટાડો જોવા મળ્યો (કોષ્ટક 1). એસિડિટીમાં ઘટાડો કાર્બનિક એસિડના કાર્બોહાઇડ્રેટ્સમાં રૂપાંતર અથવા એન્ઝાઇમેટિક પ્રતિક્રિયાઓ, તેમજ રસ સંગ્રહ દરમિયાન ઓક્સિડેશનને આભારી હતો.64કંટ્રોલ સફરજનના રસ અને એન્ઝાઇમ-ટ્રીટેડ નમૂનાઓની કુલ એસિડિટી અન્ય રસ (સ્ટ્રોબેરીનો રસ 0.9%, આલુનો રસ 2.2%, કુમકવાટનો રસ 1.0%, જરદાળુનો રસ 2.4%, નારંગીનો રસ 0.8%) કરતા ઓછી હતી, પરંતુ અન્ય રસ (દા.ત., નાસપતીનો રસ 0.3%) જેવી જ હતી.62તાજા સ્ક્વિઝ્ડ સફરજનના રસમાં આ તફાવતો વૃદ્ધિની સ્થિતિ, આનુવંશિક પરિબળો, પરિપક્વતા સ્તર અને પ્રક્રિયા પદ્ધતિઓ જેવા વિવિધ પરિબળોને કારણે હોઈ શકે છે.65સિંઘ અને અન્ય લોકો દ્વારા રજૂ કરાયેલા પરિણામો સાથે નિયંત્રણ અને લેકેસ-ટ્રીટેડ સફરજનના રસની કુલ એસિડિટીમાં ઘટાડો સુસંગત છે.66૭૪ દિવસના સંગ્રહ પછી જિન નુઓ સફરજનના રસની કુલ એસિડિટીમાં ઘટાડો અંગે. બીજી બાજુ, ઓશ્મિયાન્સ્કી અને વોજડાયલો67પરંપરાગત સ્પષ્ટીકરણ પદ્ધતિઓની અસરનો અભ્યાસ કરતી વખતે સફરજનના રસની એસિડિટીમાં કોઈ નોંધપાત્ર ફેરફાર જોવા મળ્યા નથી.
કોષ્ટક 1 માં રજૂ કરાયેલા પરિણામો દર્શાવે છે કે લેક્કેસ-ટ્રીટેડ સફરજનના રસનું કુલ દ્રાવ્ય ઘન (TSS) મૂલ્ય સારવાર ન કરાયેલ નમૂના કરતા વધારે હતું. આ પરિણામો પ્રકાશિત અભ્યાસો સાથે સુસંગત છે.. ૬૮વધુમાં, કોષ્ટક 1 દર્શાવે છે કે નિયંત્રણ સફરજનના રસ જૂથનું TSS મૂલ્ય પ્રારંભિક સમય બિંદુએ 9.58 હતું અને સંગ્રહ સમયગાળાના અંત સુધીમાં 11.05 સુધી પહોંચી ગયું છે. આ મૂલ્યો હમીદ અને અન્ય દ્વારા નોંધાયેલા તાજા સફરજનના રસના TSS મૂલ્યો કરતા ઓછા છે.. ૬૯(અનુક્રમે ૧૧.૨ અને ૧૧.૮૦). લેકેસ-ટ્રીટેડ સફરજનના રસના નમૂનાઓનું TSS મૂલ્ય નોંધપાત્ર રીતે વધ્યું, જે ૧૧.૨૩ થી શરૂ થયું અને ૪°C પર બે અઠવાડિયાના સંગ્રહ પછી ૧૨.૯૩ સુધી પહોંચ્યું (કોષ્ટક ૧). સંગ્રહ દરમિયાન TSS માં સમાન વધારો સાઇટ્રસ ફળો, લીંબુ અને મીઠી નારંગીમાં પણ જોવા મળ્યો. સંગ્રહ દરમિયાન કુલ દ્રાવ્ય ઘન પદાર્થો (TSS) માં વધારો પોલિસેકરાઇડ્સ (સ્ટાર્ચ) ના મોનોસેકરાઇડ્સ (ખાંડ) માં હાઇડ્રોલિસિસ, રસના નિર્જલીકરણને કારણે સાંદ્રતામાં વધારો અને રસમાં પેક્ટીનનું દ્રાવ્ય ઘન પદાર્થોમાં અધોગતિને કારણે હોઈ શકે છે. કુલ દ્રાવ્ય ઘન પદાર્થો (TSS) માં વધારો દ્રાવ્ય શર્કરામાં વધારાને કારણે થવાની શક્યતા છે, જે અનુક્રમે પેક્ટીન અથવા સેલ્યુલોઝ દ્વારા દ્રાવ્ય શર્કરામાં રૂપાંતરિત થવાથી અથવા સ્ટાર્ચના શર્કરામાં હાઇડ્રોલિસિસ દ્વારા રચાય છે, જેમ કે હેમેડ એટ અલ દ્વારા અહેવાલ છે.૬૯.સફરજનના રસના ગુણધર્મો પર લેકેસની અસર દૃષ્ટિની રીતે જોઈ શકાય છે, કારણ કે લેકેસ-ટ્રીટેડ સફરજનનો રસ સારવાર ન કરાયેલા રસ કરતાં વધુ સારી પ્રવાહિતા અને ઓછી સ્નિગ્ધતા દર્શાવે છે. આ અવલોકન કોષ્ટક 1 માં નોંધાયેલ છે; એન્ઝાઇમ-ટ્રીટેડ નમૂનાની સ્નિગ્ધતા 1.87 cP હતી, જ્યારે નિયંત્રણ નમૂનાની સ્નિગ્ધતા 2.95 cP હતી. પેક્ટીન જેવા પદાર્થોની ઉચ્ચ પાણી-ધારણ ક્ષમતા અને સંયોજક નેટવર્ક માળખાની રચનાને કારણે સ્નિગ્ધતામાં આ નોંધપાત્ર ઘટાડો થવાની સંભાવના છે.
આ અભ્યાસમાં, સફરજનના રસના બ્રાઉનિંગ ઇન્ડેક્સ (BI) પર લેકેસની અસરની તપાસ સ્પેક્ટ્રોફોટોમીટરનો ઉપયોગ કરીને 420 nm પર શોષણ માપીને કરવામાં આવી હતી. પરિણામો કોષ્ટક 1 માં દર્શાવવામાં આવ્યા છે. સંગ્રહ દરમિયાન, સારવાર કરાયેલા અને સારવાર ન કરાયેલા બંને જૂથોમાં સફરજનના રસના નમૂનાઓના BI માં ધીમે ધીમે વધારો થતો વલણ જોવા મળ્યું. BI બ્રાઉનિંગની ડિગ્રીને પ્રતિબિંબિત કરે છે અને તે તરીકે સેવા આપી શકે છેએક મહત્વપૂર્ણએન્ઝાઇમેટિક અને નોન-એન્ઝાઇમેટિક બ્રાઉનિંગ પ્રતિક્રિયાઓનું સૂચક. સંગ્રહ દરમિયાન શોષણ નોંધપાત્ર રીતે વધ્યું (P < 0.05). સંગ્રહના અંતે,એ૪૨૦નિયંત્રણ અને એન્ઝાઇમ-સારવાર કરાયેલા જૂથોમાં સફરજનના રસના નમૂનાઓનું મૂલ્ય અનુક્રમે લગભગ 217% અને 121% વધ્યું (કોષ્ટક 1). પરિણામો દર્શાવે છે કે એન્ઝાઇમ સારવાર અસરકારક રીતે બ્રાઉનિંગ ડિગ્રીને લગભગ 56% ઘટાડી શકે છે. બેઝેરા એટ અલના પરિણામો.[૧૯]] અમારા પરિણામો સાથે સુસંગત છે; તેઓએ સફરજનના રસને સ્પષ્ટ કરવા માટે લેકેસ-ગ્લુટારાલ્ડીહાઇડ-નાળિયેર ફાઇબરનો ઉપયોગ કર્યો, જેનાથી તેનો મૂળ રંગ 61% ઓછો થયો.
ફળોના રસમાં રહેલા પોલિફીનોલ્સ માનવ શરીર પર સકારાત્મક પોષક અને રોગનિવારક અસરો ધરાવે છે, તેમ છતાં તેઓ પ્રોટીન સાથે પણ પ્રતિક્રિયા આપી શકે છે, જેના કારણે રસમાં વાદળછાયુંપણું, કાંપ અથવા ગંદકી થાય છે, જેનાથી ઉત્પાદનનો સ્વાદ અને સુગંધ બદલાય છે અને તેની શેલ્ફ લાઇફ ઓછી થાય છે.71આ અભ્યાસનો ઉદ્દેશ્ય પ્લ્યુરોટસ ઓસ્ટ્રીટસ NRC 620 માંથી લેકેસનો ઉપયોગ કરીને સફરજનના રસમાં ફેનોલિક સંયોજન સામગ્રીને સુરક્ષિત રીતે ઘટાડવાનો હતો. કોષ્ટક 1 માં રજૂ કરાયેલા પરિણામો દર્શાવે છે કે 4 °C તાપમાને સંગ્રહ પહેલાં લેકેસ-ટ્રીટેડ સફરજનના રસમાં કુલ ફેનોલિક સંયોજન સામગ્રી નોંધપાત્ર રીતે ઘટી ગઈ હતી. વધુમાં, અભ્યાસ કરાયેલા બંને નમૂનાઓમાં સંગ્રહ દરમિયાન કુલ ફેનોલિક સંયોજન સામગ્રીમાં પણ ઘટાડો થયો હતો (કોષ્ટક 1). સેન્ડ્રી એટ અલ દ્વારા સંશોધન.72દર્શાવે છે કે એન્ઝાઇમ-સારવાર કરાયેલ સફરજનનો રસ તેની એન્ટીઑકિસડન્ટ પ્રવૃત્તિ અને ફિનોલિક સંયોજન સામગ્રી જાળવી શકે છે. જોકે, લેટરા એટ અલ દ્વારા કરવામાં આવેલા અભ્યાસના પરિણામો.73દર્શાવે છે કે નારંગીના રસને ફંગલ લેકેસથી સારવાર આપવાથી તેમાં ફેનોલિક સંયોજનોનું પ્રમાણ 45% સુધી ઘટાડી શકાય છે.
ફેનોલિક સંયોજનોમાં મુક્ત રેડિકલ સ્કેવેન્જિંગ, સિંગલ ઓક્સિજન ઘટાડો અને શમન, હાઇડ્રોજન અણુ ટ્રાન્સફર અને મુક્ત રેડિકલને ઇલેક્ટ્રોન દાન જેવા ગુણધર્મો હોવાનું દર્શાવવામાં આવ્યું છે, જે તેમને શક્તિશાળી એન્ટીઑકિસડન્ટ બનાવે છે.74તેથી, આ અભ્યાસમાં, 14 દિવસ માટે રેફ્રિજરેટરમાં સંગ્રહિત સફરજનના રસની એન્ટીઑકિસડન્ટ પ્રવૃત્તિ પર લેકેસની અસરનું મૂલ્યાંકન કરવા માટે DPPH અને FRAP-આધારિત પદ્ધતિઓનો ઉપયોગ કરવામાં આવ્યો હતો (કોષ્ટક 2). બંને પદ્ધતિઓએ સંગ્રહ દરમિયાન એન્ટીઑકિસડન્ટ પ્રવૃત્તિમાં વધારો દર્શાવ્યો હતો, જે મુક્ત ફિનોલિક સંયોજનોમાં વધારો અથવા મેલાર્ડ પ્રતિક્રિયા ઉત્પાદનો (MRPs) ની રચનાને કારણે હોઈ શકે છે, જેમાં મેલાર્ડ પ્રતિક્રિયા ઉત્પાદનો એન્ટીઑકિસડન્ટ પ્રવૃત્તિમાં વધારો થવાનું કારણ હોઈ શકે છે.75બિન-ઉત્સેચક બ્રાઉનિંગ પ્રતિક્રિયાઓ (એસ્કોર્બિક એસિડ ડિગ્રેડેશન, મેલાર્ડ પ્રતિક્રિયાઓ અને ખાંડના એસિડ-ઉત્પ્રેરિત ડિગ્રેડેશન સહિત) ભૂરા રંગદ્રવ્યો (મેલાનોઇડિન) ઉત્પન્ન કરે છે. મધ્યવર્તી એસ્કોર્બિક એસિડ ડિગ્રેડેશન ઉત્પાદનો અને ખાંડ ડિગ્રેડેશન ઉત્પાદનો (જેમ કે કાર્બોનિલ સંયોજનો) મેલાર્ડ પ્રતિક્રિયાઓ દ્વારા એમિનો એસિડ સાથે પ્રતિક્રિયા આપી શકે છે.76સંગ્રહ દરમિયાન ફળો અને શાકભાજીના ભૂરા થવાનો વ્યાપક અભ્યાસ કરવામાં આવ્યો હોવા છતાં, આ પ્રતિક્રિયાઓ વિશેની આપણી સમજ મર્યાદિત રહે છે.77FRAP પદ્ધતિની તુલનામાં, લેકેસ-ટ્રીટેડ સફરજનના રસમાં DPPH પદ્ધતિ દ્વારા નોંધપાત્ર રીતે ઓછી એન્ટીઑકિસડન્ટ પ્રવૃત્તિ જોવા મળી (કોષ્ટક 2), અને સંગ્રહ સમય વધતાં બધા નમૂનાઓની એન્ટીઑકિસડન્ટ પ્રવૃત્તિમાં નોંધપાત્ર વધારો થયો. આ અભ્યાસમાં એન્ટીઑકિસડન્ટ પ્રવૃત્તિ નક્કી કરવા માટે બે અલગ અલગ પદ્ધતિઓનો ઉપયોગ કરવામાં આવ્યો હતો કારણ કે તેમના સિદ્ધાંતો અલગ અલગ છે. DPPH પદ્ધતિ મુક્ત રેડિકલને બેઅસર કરવાની ક્ષમતાને માપે છે, જ્યારે FRAP પદ્ધતિ આયર્ન આયન ઘટાડવાની ક્ષમતાને માપે છે. તેથી, અભ્યાસ કરાયેલા નમૂનાઓની એન્ટીઑકિસડન્ટ પ્રવૃત્તિને વધુ સારી રીતે સમજવા માટે એન્ટીઑકિસડન્ટ પ્રવૃત્તિ નક્કી કરવા માટે બહુવિધ પદ્ધતિઓનો ઉપયોગ કરવાની ભલામણ કરવામાં આવે છે.78
આ અભ્યાસના મુખ્ય તારણો પૈકી એક એ છે કે *પ્લ્યુરોટસ ઓસ્ટ્રીટસ* લેકેસ NRC 620 70°C અને pH 3.0 પર શ્રેષ્ઠ પ્રવૃત્તિ દર્શાવે છે. રસના સ્પષ્ટીકરણ માટે સામાન્ય રીતે ઉપયોગમાં લેવાતા અન્ય ફંગલ લેકેસ, જેમ કે *ટ્રેમેટીસ વર્સિકલર* અને *ગેનોડર્મા લ્યુસિડમ* લેકેસની તુલનામાં, *પી. ઓસ્ટ્રીટસ* NRC 620 ઉચ્ચ થર્મલ સ્થિરતા અને વધુ એસિડિક pH દર્શાવે છે. *ટ્રેમેટીસ વર્સિકલર* અને *ગેનોડર્મા લ્યુસિડમ* ના લેકેસ સામાન્ય રીતે 50-60°C ની રેન્જમાં અને 3.5 અને 5.0 ની વચ્ચેના pH મૂલ્યો પર શ્રેષ્ઠ પ્રવૃત્તિ દર્શાવે છે. આ તફાવત સુધારેલ રસ સ્પષ્ટીકરણ કાર્યક્ષમતામાં ફાળો આપી શકે છે, ખાસ કરીને એસિડિક રસ માટે જ્યાં નીચા pH મૂલ્યો પર સ્થિરતા મહત્વપૂર્ણ છે. *પી. ની અનન્ય લાક્ષણિકતા અન્ય અભ્યાસ કરાયેલ ફંગલ લેકેસની તુલનામાં, *પ્લ્યુરોટસ ઓસ્ટ્રીટસ* NRC 620 વધુ પડકારજનક પરિસ્થિતિઓમાં અસરકારક રીતે કાર્ય કરવાની ક્ષમતા દર્શાવે છે. તેનું ઉચ્ચ શ્રેષ્ઠ પ્રવૃત્તિ તાપમાન ઔદ્યોગિક ઉપયોગોમાં સંભવિત ફાયદા સૂચવે છે, જેમ કે ઝડપી પ્રતિક્રિયા દર અને ઘટાડેલા માઇક્રોબાયલ દૂષણ. તેનું ઓછું pH, જે ઘણા રસના એસિડિક સ્વભાવને અનુરૂપ છે, તે રસ સ્પષ્ટીકરણ પ્રક્રિયાઓમાં ઉપયોગી થઈ શકે છે. આ પરિણામો મોટા પાયે ઉપયોગ માટે વધુ સંશોધનને વાજબી ઠેરવે છે, જે *Pleurotus ostreatus* NRC 620 ને પરંપરાગત ફંગલ લેકેસ સ્ત્રોતો માટે એક વ્યવહારુ વિકલ્પ બનાવે છે. અગાઉના અભ્યાસોની તુલનામાં, અમને જાણવા મળ્યું કે શ્રેષ્ઠ તાપમાન 60°C છે અને શ્રેષ્ઠ pH 3.0 છે. 80 મિનિટ માટે 60°C પર પ્રતિક્રિયા પછી, *Ganoderma lucidum* લેકેસ જાળવી રાખવામાં આવ્યું.46તેની પ્રવૃત્તિનો %.79 કુર્નિયાવતી અને નિસેલ અનુસાર80, *ગેનોડર્મા લ્યુસિડમ* ઉત્સેચકો 25°C અને pH મૂલ્યો 5.0 થી 8.0 સુધી ઉત્તમ થી મધ્યમ સ્થિરતા દર્શાવે છે, અને pH 6.0 અને 10 થી 30°C તાપમાને સ્થિરતા દર્શાવે છે. આ અભ્યાસમાં, અમે શોધી કાઢ્યું કે *પ્લ્યુરોટસ ઓસ્ટ્રીટસ* માટે ઉત્સેચક પ્રવૃત્તિ માટે શ્રેષ્ઠ pH અને તાપમાન અનુક્રમે 3.0 અને 70°C હતું. 40°C અને 50°C પર બે કલાક માટે ઇન્ક્યુબેશન પછી, એન્ઝાઇમ તેની પ્રવૃત્તિના અનુક્રમે 68.33% અને 59.61% જાળવી રાખ્યું. વધુમાં, પ્લેયુરોટસ ઓસ્ટ્રીટસ NRC 620 લેકેસે 50°C થી 80°C સુધીની વિશાળ તાપમાન શ્રેણીમાં ઉચ્ચ પ્રવૃત્તિ દર્શાવી, લગભગ મહત્તમ પ્રવૃત્તિ (69%–98%) સુધી પહોંચી, મહત્તમ પ્રવૃત્તિ 70°C પર જોવા મળી.
નિષ્કર્ષમાં, સ્થિર પરિસ્થિતિઓમાં મેળવેલ ઓઇસ્ટર મશરૂમ લેકેસ NRC620 એ pH અને તાપમાનની સ્થિતિઓની શ્રેણીમાં શ્રેષ્ઠ પ્રવૃત્તિ અને સ્થિરતા દર્શાવી, જે અન્ય ઉત્સેચક સ્ત્રોતોની તુલનામાં શ્રેષ્ઠ સ્થિરતા દર્શાવે છે. 10 mM MgSO₄ અને CuSO₄ ના ઉમેરાથી ઉત્સેચક પ્રવૃત્તિમાં અનુક્રમે આશરે 21% અને 35% વધારો થયો. જ્યારે સફરજનના રસમાં પ્રક્રિયા કરવામાં આવી, ત્યારે એન્ઝાઇમ pH અને સ્નિગ્ધતા ઘટાડે છે, જ્યારે સંગ્રહ દરમિયાન ફિનોલિક સામગ્રીમાં થોડો ઘટાડો થાય છે.
આ પરિણામો ખાદ્ય ઉદ્યોગમાં, ખાસ કરીને પીણાના સ્પષ્ટીકરણમાં, લેકેસની સંભાવનાની પુષ્ટિ કરે છે. ફિનોલિક સંયોજનોને ખાસ કરીને તોડીને, લેકેસ માત્ર ગંદકી ઘટાડે છે અને સ્પષ્ટતામાં સુધારો કરે છે, પરંતુ હળવા કાર્યકારી પરિસ્થિતિઓમાં ફળોના રસની ગુણવત્તા પણ જાળવી રાખે છે. જિલેટીન, બેન્ટોનાઇટ અને સિલિકા જેલ જેવા પરંપરાગત સ્પષ્ટીકરણ એજન્ટોથી વિપરીત, લેકેસ કચરો ઉત્પન્ન કરતું નથી અથવા પીણાંમાંથી સુખદ સુગંધ દૂર કરતું નથી, જે તેને વધુ પર્યાવરણને અનુકૂળ અને ટકાઉ વિકલ્પ બનાવે છે. વધુમાં, અન્ય ઉત્સેચકો અને ગાળણ પદ્ધતિઓની તુલનામાં, લેકેસ ઉત્પાદનની ગુણવત્તા સાથે સમાધાન કર્યા વિના લક્ષિત અને ખર્ચ-અસરકારક ઉકેલ પ્રદાન કરે છે.
ક્યોમુહિમ્બો, એચડી અને બ્રિંક, એચજી. કોપર-ધરાવતા લેકેસીસના ઉપયોગો અને સ્થિરીકરણ વ્યૂહરચનાઓ; એક સમીક્ષા. હેલિઓન 9, e13156 (2023).
પોસ્ટ સમય: ડિસેમ્બર-૧૫-૨૦૨૫